四环素类药物（Tetracyclines，TCs）是以四并苯为母核的一族抗生素，其中四环素、土霉素、金霉素及多西环素以其优良的抗菌性、稳定的药性及低廉的价格，在畜牧业生产中广

泛用于疾病的治疗和预防。但该类药物过量使用会导致畜禽产品中高浓度药物残留，直接影响消费者身体健康。

本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，具有快速、简便、准确和灵敏度高等优点，操作时间需45min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20~25℃）平衡 30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。若试剂中有晶体析出，回温溶解后方可使用。

2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入锡箔袋，保存于 2~8℃。

3、洗涤液【配液 1】在使用前也需回温。

4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做 2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、加标准品/样本：加标准品或样本 100μL/孔到对应的微孔中，然后加入四环素类酶标物 50μL/孔，再加入四环素类抗试剂 50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置于 25℃避光环 境中反应 30min。

6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液【配液 1】250μL/孔，充分洗涤 4~5 次，每次间隔 10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

7、显色：加入底物液 A 液 50μL/孔，再加底物液 B 液 50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置于 25℃避光环境反应 15min。

8、测定：加入终止液 50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于 450nm 处（建议用双波长 450/630nm 检测，请在 5min 内读完数据），测定每孔 OD 值。（若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定）。