黄曲霉毒素试剂盒的正确使用方法主要基于酶联免疫吸附测定（ELISA）技术，涵盖样品准备、处理、检测和分析步骤。以下综合整理关键操作流程，适用于常见试剂盒（如检测B1或M1毒素类型）：

1. 准备工作

· ‌试剂平衡‌：从冷藏取出试剂盒，置于室温（20-25℃）平衡30分钟以上，确保试剂温度稳定。‌

· ‌溶液配制‌：根据待检样本类别（如谷物、食用油、酱油等），参照说明书配制样本处理液；例如，奶粉样本需称取5g±0.05g，加入30mL去离子水，2500r/min振荡30秒。‌

· ‌洗涤液准备‌：若使用浓缩洗涤液，按1:20比例用蒸馏水稀释（如20×浓缩液加19份水）。‌

2. 样品处理方法（依据样本类型调整）

· ‌谷物（大米、玉米等）‌：称取5.0g粉碎样品，加25.0ml甲醇水溶液（1:1），振摇15分钟后过滤，弃初滤液，收集滤液并按标准稀释。‌

· ‌食用油（花生油、菜油等）‌：直接取3-4滴油品滴入试剂盒，或加适量样本至甲醇水溶液中振荡提取分层后取下层液。‌

· ‌液体样本（酱油、醋、酒类）‌：酱油/醋样本准确称取5.0g，用三氯甲烷分层提取，挥干后加甲醇水溶解稀释；啤酒取样5.0ml，加甲醇定容后振摇10分钟。‌

· ‌高蛋白或复杂样本（奶粉、酱类）‌：需额外过滤或离心步骤（3000r/min离心10分钟），去除杂质后取上清液。‌

3. 检测操作步骤

1. ‌加样‌：取出微孔板，采用反向移液法加入30μL标准品或处理后的样本至对应孔中，再加70μL抗体工作液，轻轻振荡混匀。‌

2. ‌孵育反应‌：盖板膜密封后置25℃避光环境反应15分钟；小心揭膜，用洗涤液重复洗涤4-5次（每次静置1分钟），拍干去除气泡。‌

3. ‌酶标物添加‌：每孔加入100μL酶标记物，混匀后盖板，25℃避光反应15分钟；重复洗涤拍干步骤。‌

4. ‌显色与终止‌：加100μL底物液（TMB）显色，轻轻振荡混匀；10-15分钟后加50μL终止液，混匀待测。‌

4. 结果读取与分析

· 将微孔板放入酶标仪，选择预设模板进行测量；点击“D值”查看吸光度（OD值），切换至“浓度”或“曲线”模式分析结果。‌

· ‌结果判读‌：阴性显示双杠（可安全食用），阳性为单杠需进一步送检；样本吸光度与毒素含量成负相关，需乘以稀释倍数计算实际浓度（如稀释5倍则结果×5）。‌

注意事项

· ‌温度控制‌：最佳反应温度为25℃，过高或过低影响吸光度准确性；冻存样本需-20℃分装，避免反复冻融。‌

· ‌操作细节‌：避免板条长期暴露于空气；所有液体组分使用前充分摇匀；洗涤时确保彻底去除残留液。‌

· ‌灵敏度与回收率‌：试剂盒灵敏度通常为0.03ppb，样本回收率应在75%-87%范围内（如谷物85±15%）；若结果异常，复核稀释步骤或重复检测。