1.准备和个人防护‌：实验人员穿戴实验服、口罩和手套，使用酒精棉球擦拭操作台和手套区域，并点燃酒精灯确保无菌环境。样品前处理包括称量25克固体或半固体样品，加入225mL无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液，拍打均质2分钟制成初始稀释液 ‌。

2.‌样品稀释和接种‌：将稀释液充分震荡均匀，使用移液枪吸取1mL样品匀液；对于液体样品，可吸取25mL加入225mL稀释液制成1:10匀液，再通过梯度稀释（如1:100）制成不同浓度稀释液 。吸取稀释液垂直滴加在菌落总数测试片中央区域的培养基上，避免气泡产生，使用压板器轻轻压下使样液均匀分布，静置至少2分钟待吸收。

3.‌培养过程‌：将测试片透明面向上正置于培养箱中，设置温度36±1℃，培养24~48小时；水产品样品需调整至30±1℃培养48~72小时，测试片堆叠不超过20片以防止重叠影响结果 ‌。

4.‌结果计数和计算‌：培养后，细菌生长显示红色菌落，使用目视或菌落计数器在30-300CFU范围内计数；微小菌落计入，弥散菌落计为一个系统，计数困难时可选择代表性小方格计算平均后乘以20估算。基于稀释倍数和菌落数计算菌落总数，优先选用菌落数在适宜范围的平板，并通过标准公式加权平均报告结果。

注意事项：避免测试片长时间暴露于紫外光或荧光灯下，使用后需高压灭菌处理；测试片出现少量黑点或气泡为正常现象，不影响检测。